LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑 P09110 是基于PEI(Polyethylenimine)的產(chǎn)品，因其有效的瞬轉(zhuǎn)效率和蛋白產(chǎn)量，已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)和基礎(chǔ)科研中的蛋白表達(dá)研究，年文獻(xiàn)發(fā)表量已達(dá)上千篇。PEI是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI用作轉(zhuǎn)染試劑，將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物，這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。PEI-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用，提高轉(zhuǎn)染效率。PEI轉(zhuǎn)染試劑能有效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO、COS、Hela、昆蟲(SF9、SF21)等真核細(xì)胞系，也可用于較大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染。Polysciences目前主推三款不同市場(chǎng)定位的PEI轉(zhuǎn)染試劑。
 

　　LeapWal PolyShooter 轉(zhuǎn)染試劑 P09110轉(zhuǎn)染步驟：轉(zhuǎn)染前一天將細(xì)胞分至培養(yǎng)板，轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞應(yīng)50-80%融合。將細(xì)胞以1-3×105/2 ml接種于6孔板后孵育過夜將達(dá)到如此密度。將FuGENE6 Reagent在室溫孵育10-15分鐘。使用之前將FuGENE6顛倒混勻一下。
 

　　1. 在PCR管中加入不含血清和雙抗的營(yíng)養(yǎng)液以稀釋FuGENE6，直至總體積到100 ul。
 

　　2. 將3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入營(yíng)養(yǎng)液，輕彈管壁混合。
 

　　3. 加入1-2 ug的DNA溶液(0.02-2.0 ug/ul)，輕彈管壁混合。
 

　　4. 室溫孵育20分鐘。
 

　　5. 將6孔板中的舊營(yíng)養(yǎng)液吸出，加入約1 ml不含血清和雙抗的營(yíng)養(yǎng)液洗滌一次，再加入2 ml不含血清和雙抗的營(yíng)養(yǎng)液。
 

　　6. 將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細(xì)胞，混勻使之均勻分布。
 

　　7. 3-8小時(shí)后，加入血清或換成含血清的營(yíng)養(yǎng)液。